【储存条件及有效期】

1. 运输：试剂盒必须在冷冻条件下运输。

2. 保存： -20℃保存，应避免反复冻融。

3. 有效期： 12 个月，请在有效期内使用。

【适用仪器】

经过多通道校正的全自动荧光 PCR 检测仪，需含 FAM 和 VIC (HEX) 检测通道。如 ABI7500 、7500FAST 、Bio-Rad CFX96 、Roche LightCycler 480Ⅱ 、上海宏石 SLAN-96P 等全自动荧光 PCR 检测仪。

【检验原理】

本试剂盒采用实时荧光 PCR 技术，适用于检测从生肉及生肉制品中纯瘦肉部分中提取的猪源性成分核酸。 每一个反 应体系中均含有检测猪基因组的特引物和荧光探针，通过收集 PCR 扩增产生的荧光信号，实现对猪源性成分核酸的 定性和半定量检测。

本试剂盒设置有内标对照，采用 VIC 荧光基团标记，通过内标对照对 PCR 扩增过程进行监控， 提示检测结果的假阴 性。

【主要组成成分】

序号	组分名称	25T 规格	50T 规格
1	无核酸酶水	1000μL×1 管	1000μL×1 管
2	2×核酸扩增反应液	312.5μL×1 管	625μL×1 管
3	25×PCR 酶	25μL×1 管	50μL×1 管
4	10×引物探针反应液(A3391)	62.5μL×1 管	125μL×1 管
5	A3391- 阳性对照	50μL×1 管	50μL×1 管
6	阴性对照	1000μL×1 管	1000μL×1 管

注意：不同批次试剂盒成分不可混用！

【样本要求】

从生肉及生肉制品的纯瘦肉部分中提取的核酸样品，均可使用本试剂盒进行检测。

【操作步骤】

1. 样品制备

用水充分冲洗生肉及生肉制品并吸干水分后， 取大约30- 100mg的样本，置于已的研钵中，加入液氮充分研磨， 然后按照动物组织基因组提取试剂盒 (如血液/细胞/组合基因组DNA提取试剂盒，天根DP304) 说明书提取核酸。 若样本 提取后不立即检测，也可存于-20℃或-70℃备用，应避免反复冻融。

定性检测：提取的DNA直接作为模板加入PCR反应液中，根据Ct值可以判定样本核酸中是否含有猪源性成分。

半定量检测：提取的DNA经过浓度测量后，调整核酸浓度为10ng/μL进行PCR，最终根据结果判定表判定其猪源性成 分质量分数。

2. 反应体系配制

(1) 体系配制： 从试剂盒中取出试剂室温融化，待试剂完全解冻，颠倒混匀后瞬时离心。若待检样品数量为 n (n= 样本数+阳性对照+阴性对照)，则按 n+1 个反应配制体系，反应体系配制如下表。

试剂	1个反应体系的量	n+1个反应体系的量
无核酸酶水	7μL	7μL× (n+1)
2×核酸扩增反应液	12.5μL	12.5μL× (n+1)
25×PCR 酶	1μL	1μL× (n+1)
10×引物探针反应液(A3391)	2.5μL	2.5μL×(n+1)

(2)体系分装：将上述反应液混匀离心后，按照每管23μL分装于荧光PCR仪适用的PCR管中。

(3)加样： 分别取步骤1中提取的2μL DNA样品加入到分装好的PCR管中， 总反应体积为25μL 。阴性对照反应管中 加入阴性对照2μL ，阳性对照反应管中加入相应模板2μL。